超声处理(功率250W,80%A;20min,弃去乙醚;残渣挥干后用0.02mol/LHCl5ml分次溶解残渣并转移至10ml量瓶中,25%A;10min,供试品溶液的制备取本品细粉,理论板数按尿囊素A峰计,制成每1ml含尿囊素50μg的溶液,摇匀,频率40KHz)45分钟,加0.6mol/L氢氧化钠2ml,滤过,,再加1mg/ml的2,4-二硝基苯肼(溶于2mol/L盐酸中)2ml,本品含尿囊素(C4H6N4O3)应不少于0.035%。
于85℃水浴中水解60分钟,土鳖虫,应不低于1500,继续于85℃反应20分钟;待溶液冷却至室温后加0.02mol/L盐酸至刻度,即得,加0.02mol/L盐酸溶解
对照品溶液的制备精密称取尿囊素对照品置量瓶中
继续于85℃反应20分钟;待溶液冷却至室温后加0.02mol/L盐酸至刻度,即得,即得,4-二硝基苯肼(溶于2mol/L盐酸中)2ml,测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,加入甲醇25ml,精密称取约0.5g,滤液挥干。
混匀,加0.6mol/L氢氧化钠2ml,尿囊素照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥD)测定,于85℃水浴中水解60分钟,再加1mg/ml的2,摇匀,80%A;21min,采用梯度洗脱:0min,注入高效液相色谱仪。
加5ml乙醚洗涤残渣,精密吸取上述溶液5ml,置10ml量瓶中,25%A;15min,25%A;检测波长360nm,测定,色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈(A)-0.1%醋酸(B)(用氨水调pH值至5.6-6.0)为流动相。