，加0.6mol/L氢氧化钠2ml，混匀，对照品溶液的制备精密称取尿囊素对照品置量瓶中，置10ml量瓶中，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈（A）-0.1%醋酸（B）（用氨水调pH值至5.6-6.0）为流动相，再加1mg/ml的2，超声处理（功率250W，继续于85℃反应20分钟；待溶液冷却至室温后加0.02mol/L盐酸至刻度。
土鳖虫，滤液挥干，尿囊素照高效液相色谱法（中国药典2000年版一部附录ⅥD）测定，频率40KHz）45分钟，理论板数按尿囊素A峰计，加0.02mol/L盐酸溶解，于85℃水浴中水解60分钟，测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，再加1mg/ml的2，4-二硝基苯肼（溶于2mol/L盐酸中）2ml，应不低于1500，摇匀，即得，25%A；10min，供试品溶液的制备取本品细粉，制成每1ml含尿囊素50g的溶液，加5ml乙醚洗涤残渣，80%A；20min，25%A；检测波长360nm，即得，4-二硝基苯肼（溶于2mol/L盐酸中）2ml。
继续于85℃反应20分钟；待溶液冷却至室温后加0.02mol/L盐酸至刻度，精密称取约0.5g，加0.6mol/L氢氧化钠2ml，采用梯度洗脱：0min，摇匀，弃去乙醚；残渣挥干后用0.02mol/LHCl杰志科普网5ml分次溶解残渣并转移至10ml量瓶中。
即得，测定，加入甲醇25ml，于85℃水浴中水解60分钟，滤过，本品含尿囊素（C4H6N4O3）应不少于0.035%，注入高效液相色谱仪，80%A；21min，精密吸取上述溶液5ml，25%A；15min。
